EGFRvIII interagit avec PUMA, mais pas Bax et Bmf, dans basket blanche femme puma les xénogreffes GBM. Les protéines extraites de trois xénogreffes de GBM exprimant EGFRvIII, comme indiqué dans le panneau b, ont été soumises à une immunoprécipitation / un transfert de type Western pour déterminer l'étendue de l'interaction de EGFRvIII avec des protéines pro-apoptotiques co-exprimées. Un anticorps anti-EGFR (Ab) a été utilisé pour immunoprécipiter EGFRvIII.
l'étendue de la co-expression de EGFR / EGFRvIII-PUMA est significativement plus élevée dans les gliomes malins de haut grade (20% chez les AA et 34,1% dans les GBM) que dans les gliomes de bas grade (6,3 à 7,7%). ) et des tissus cérébraux normaux (0%). L'analyse basket femme puma noir de régression indique en outre que l'EGFR seul, PUMA seul et la co-expression EGFR / PUMA sont en corrélation significative avec le degré de gliome.La figure 2b montre deux gliomes immunocolorés représentatifs dans lesquels un GBM.
Un gliome basket femme puma pas cher de grade II (panneau inférieur) se colorent négativement pour les deux protéines. L'anticorps utilisé dans l'IHC EGFR / EGFRvIII reconnaît un épitope C-terminal présent dans les récepteurs EGFR et EGFRvIII, et des coupes tumorales consécutives ont été utilisées dans ces études. Le degré élevé de co-expression de EGFR / EGFRvIII-PUMA dans des échantillons de GBM primaires est cohérent avec les observations de la figure 1 avec les lignées cellulaires de GBM.
Conformément basket homme puma aux résultats de la figure S1, il a été constaté qu'une sous-population de GBM exprimait PUMA, mais pas des niveaux substantiels d'EGFR / EGFRvIII.EGFR / EGFRvIII et PUMA co-expriment dans des échantillons primaires de GBM et l'étendue de la co-expression est significativement corrélée au degré de gliome. de manière significative avec PUMA dans les GBM primaires. Une cohorte de 101 gliomes et 12 tissus cérébraux normaux a été soumise à une coloration IHC pour EGFR / EGFRvIII et PUMA.
Panneau supérieur: un GBM primaire coloré positivement pour EGFR / EGFRvIII et PUMA. Panneau inférieur: gliome de grade II présentant une coloration négative pour les deux protéines. Des sections tumorales consécutives ont été utilisées dans ces études.Pour déterminer si PUMA basket noir femme puma est essentiel pour l'induction de l'apoptose dans les GBM, un ARNsi spécifique de PUMA a été utilisé pour réguler négativement la transcription de PUMA et la réponse des cellules U87MG GBM.
Effets de la régulation négative de l'expression de PUMA et de l'augmentation de l'expression de EGFRvIII sur l'induction de l'apoptose dans les cellules GBM. L'étendue de l'apoptose est calculée comme suit: (nombre de noyaux apoptotiques) / (nombre total de noyaux). Dans les deux panels, 250 à 300 cellules ont été examinées dans chaque expérience et trois expériences indépendantes ont été menées pour dériver des moyennes et des écarts types.